參松養(yǎng)心膠囊對(duì)心室肌細(xì)胞鉀通道的影響

參松養(yǎng)心膠囊對(duì)心室肌細(xì)胞鉀通道的影響

編者按 細(xì)胞膜離子通道結(jié)構(gòu)異常、功能失調(diào)是產(chǎn)生心律失常的關(guān)鍵原因。目前的4類(lèi)抗心律失常西藥：鈉、鈣離子通道阻滯劑，β受體阻滯劑和動(dòng)作電位延時(shí)藥（以鉀通道阻滯劑為主）中，有的品種因具有抗心律失常藥的致心律失常副作用，尤其是導(dǎo)致尖端扭轉(zhuǎn)性心律失?？芍禄颊咚劳雎噬撸又溥h(yuǎn)期療效不佳，這構(gòu)成了抗心律失常藥物臨床應(yīng)用和研發(fā)的瓶頸。只有能夠改善離子通道紊亂并恢復(fù)其正常生理功能的藥物，才能阻止心律失常的發(fā)生并提高遠(yuǎn)期療效。

為此，阜外心血管病醫(yī)院浦介麟教授等以膜片鉗技術(shù)為核心，對(duì)心肌細(xì)胞離子通道蛋白的結(jié)構(gòu)、功能及其與心律失常發(fā)生的關(guān)系進(jìn)行了深入研究，并在參松養(yǎng)心膠囊對(duì)心室肌細(xì)胞鉀通道影響的最新研究中，探討了其治療心律失常的細(xì)胞電生理學(xué)作用機(jī)制。他們的系列研究在第二屆國(guó)際絡(luò)病學(xué)大會(huì)上進(jìn)行了報(bào)告。其研究結(jié)果證實(shí)，參松養(yǎng)心膠囊干粉提取溶液對(duì)豚鼠單個(gè)心室肌細(xì)胞內(nèi)向整流鉀電流(IKI)、瞬時(shí)外向鉀電流（Ito）以及豚鼠心肌細(xì)胞延遲整流鉀電流（IK）均具有不同程度的阻滯作用。他們繼對(duì)L 型鈣離子通道電流(ICa L)、鈉離子通道電流(INa)的研究之后，再次揭示:參松養(yǎng)心膠囊的抗心律失常作用可能是通過(guò)對(duì)心肌細(xì)胞離子通道的影響來(lái)實(shí)現(xiàn)的。

摘要

目的 觀察參松養(yǎng)心膠囊干粉提取溶液對(duì)單個(gè)大鼠心室肌細(xì)胞內(nèi)向整流鉀電流(IKI)、瞬時(shí)外向鉀電流（Ito）以及豚鼠心肌細(xì)胞延遲整流鉀電流（IK）的影響。

方法 用酶解法分離單個(gè)心室肌細(xì)胞，并用全細(xì)胞膜片鉗技術(shù)記錄鉀通道電流。

結(jié)果 當(dāng)藥物濃度為0.5%時(shí),可以使大鼠心肌細(xì)胞IKI內(nèi)向成分降低，使 －100mV時(shí)IKI電流密度從(-10.78±1.80)pA/pF降至(-7.18±2.05)pA/pF，平均抑制率為（33.1±16.85）%(n=11,P

結(jié)論 參松養(yǎng)心膠囊干粉提取溶液對(duì)IKI、Ito和IK均具有不同程度的阻滯作用,這可能是其抗心律失常藥理機(jī)制的一部分。

參松養(yǎng)心膠囊是由十幾種中藥組成的復(fù)方制劑，方中多數(shù)藥物均有較好的抗心律失常作用。動(dòng)物模型研究報(bào)告顯示，參松養(yǎng)心膠囊能明顯抑制藥物誘發(fā)的心律失常，并對(duì)缺血再灌注所致心律失常有明顯的保護(hù)作用。曾有隨機(jī)雙盲臨床試驗(yàn)顯示，參松養(yǎng)心膠囊對(duì)治療冠心病心律失常有明顯療效。但未見(jiàn)其對(duì)心肌細(xì)胞離子通道影響的報(bào)告。鉀離子通道是影響細(xì)胞膜復(fù)極的重要通道，本研究采用全細(xì)胞膜片鉗記錄技術(shù)，探討參松養(yǎng)心膠囊對(duì)大鼠單個(gè)心室肌細(xì)胞鉀離子通道IKI、Ito的影響，了解其藥理作用的電生理機(jī)制，為其臨床應(yīng)用進(jìn)一步提供理論和實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

材料和方法

材料

1.試劑 參松養(yǎng)心膠囊提取干粉，由石家莊以嶺藥業(yè)股份有限公司提供。Ⅱ型膠原酶(collagenase Ⅱ)為Gibico 公司產(chǎn)品。鏈蛋白酶E為Merck公司產(chǎn)品。N-2-羥乙基哌嗪-N’-2-乙磺酸(HEPES)、乙二醇-雙四乙酸(EGTA)、谷氨酸(L-Glutamic acid)、?；撬?Taurine)、天門(mén)冬氨酸、磷酸肌酸二鈉、氯化膽堿(Choline-Cl，ChCl)、氯化鈣（CaCl2）、K2ATP為Sigma公司產(chǎn)品。4-氨基吡啶(4-AP)為Fluka公司產(chǎn)品。其余試劑為國(guó)產(chǎn)分析純，由北京化學(xué)試劑公司提供。

2.溶液 ①無(wú)鈣臺(tái)氏液(mmol/L)：NaCl136、KCl5.4、MgCl21.0、NaH2PO40.33、HEPES10、Glucose10，用NaOH調(diào)pH至7.4。②KB液(mmol/L)：KCl40、KH2PO420、MgSO43.0、KOH80、L-谷氨酸50、?；撬?0、HEPES10、Glucose10、EGTA0.5，用KOH調(diào)pH至7.4。③記錄全細(xì)胞鉀電流的灌流液(mmol/L)：Choline-Cl136、MgCl21.2、KCl5.4、NaH2PO40.33、CaCl21.8,CdCl20.15,HEPES10、Glucose10，用LiOH調(diào)pH至7.4。記錄IK時(shí)加1mmol/L BaCl2以阻斷IKI電流。④記錄全細(xì)胞鉀電流的電極內(nèi)液(mmol/L)：天門(mén)冬氨酸鉀120、KCl20、HEPES5、MgCl21.0、K2ATP4、EGTA10、磷酸肌酸二鈉2，用KOH調(diào)pH至7.3。所用電極內(nèi)液均經(jīng)過(guò)直徑0.22μm微孔濾膜過(guò)濾。⑤參松養(yǎng)心膠囊藥物溶液的配制：將參松養(yǎng)心膠囊提取干粉，先用無(wú)KCl的細(xì)胞外灌流液配制成質(zhì)量濃度0.5％溶液，再調(diào)整K+濃度至5.4mmol/L,離心取上層溶液備用。

3.動(dòng)物 雄性SD大鼠，體重250～300g，由北京維通利華實(shí)驗(yàn)動(dòng)物技術(shù)有限公司提供。

方法

1.單個(gè)心肌細(xì)胞的分離

參考文獻(xiàn)并加以改進(jìn)，用急性酶解法制備心室肌單個(gè)細(xì)胞。取大鼠用50mg/kg戊巴比妥鈉腹腔注射麻醉后，開(kāi)胸取出心臟，在4℃無(wú)鈣Tyrode液中去除脂肪和心包膜，分離主動(dòng)脈并插管，行Langendorff心臟灌流（圖1），速度為6～8ml/min。先以無(wú)鈣臺(tái)氏液灌流3分鐘（灌注壓為20cm水柱），洗凈冠脈內(nèi)血液，再用低鈣酶解液（CaCl2為0.05mmol/L低鈣臺(tái)氏液,含Ⅱ型膠原酶0.4mg/ml，鏈蛋白酶E0.04mg/ml）循環(huán)灌流，大約20分鐘后，將心臟從Langendorff裝置上取下，置入室溫KB液中，剪去心房和基底部的組織，持眼科鑷將心室組織輕輕撕拉，用粗開(kāi)口的吸管緩慢吹打，使心肌細(xì)胞從心肌組織上脫離，獲得單個(gè)心室肌細(xì)胞,上清液用120目的尼龍過(guò)濾網(wǎng)過(guò)濾，心肌細(xì)胞收藏在含KB液的試管中。整個(gè)灌流系統(tǒng)溫度保持在37℃，所有的灌流液和KB液均通以100%的O2飽和30分鐘以上。將細(xì)胞在室溫下靜置半小時(shí)左右復(fù)鈣至0.25mmol/L，室溫保存?zhèn)溆?。豚鼠心肌?xì)胞的分離方法基本相同。

2.全細(xì)胞膜片鉗實(shí)驗(yàn)記錄

實(shí)驗(yàn)前吸取少許富含細(xì)胞的KB懸液于0.5ml的灌流槽中，靜置5～10分鐘，待細(xì)胞沉底附壁后，用100%O2飽和的細(xì)胞外液 實(shí)驗(yàn)前吸取少許富含細(xì)胞的KB懸液于0.5ml的灌流槽中，靜置5～10分鐘，待細(xì)胞沉底附壁后，用100%O2飽和的細(xì)胞外液進(jìn)行表面灌流5～10分鐘，流速約2ml/分鐘。在倒置顯微鏡(OLYMPUS1×70)下選擇邊緣清楚、表面光滑、橫紋清晰、無(wú)收縮的細(xì)胞。實(shí)驗(yàn)在22～24℃室溫下進(jìn)行。采用Hamill 等人的標(biāo)準(zhǔn)全細(xì)胞膜片鉗記錄方法，在電壓鉗制模式下記錄通道電流。膜片鉗放大器(Axopatch700B，美國(guó)Axon公司)，通過(guò)A/D和D/A數(shù)據(jù)轉(zhuǎn)換器（Digidata1322，美國(guó)Axon公司）同計(jì)算機(jī)相連接。刺激信號(hào)及電壓、電流輸入信號(hào)的采集均由軟件(pClampex10.0，美國(guó)Axon公司)控制。玻璃毛胚管(中國(guó)科學(xué)院物理所提供)經(jīng)微電極拉制儀(p-97，美國(guó)Sutter公司)進(jìn)行4步拉制而成，經(jīng)拋光儀(MF-830，日本Narishige公司)拋光后尖端直徑2～3μm。充灌電極內(nèi)液后入水電阻為1.5～3MΩ，補(bǔ)償液接電位后，調(diào)節(jié)三維操縱器(MHW-3，日本NARISHIGE公司)使電極尖端移向細(xì)胞表面，形成高阻封接(giga seal)，封接電阻為1GΩ以上。補(bǔ)償快電容并吸破細(xì)胞膜形成全細(xì)胞記錄模式。電容測(cè)定時(shí)給予－10mV躍階的刺激，采用Cm=τ·Iss/△V求膜電容。調(diào)節(jié)慢電容補(bǔ)償和串聯(lián)電阻補(bǔ)償80%～90%以減少瞬時(shí)充放電電流和鉗位誤差。信號(hào)經(jīng)截止頻率為1kHz的4階貝塞爾低通濾波器，采樣率為10kHz。

在記錄時(shí)，為避免電流衰減（run down）現(xiàn)象的影響，電極內(nèi)液中加入ATP，并控制實(shí)驗(yàn)在細(xì)胞破膜后25分鐘內(nèi)完成。根據(jù)實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)，將配制好的藥物溶液，用恒流蠕動(dòng)泵以2ml/分鐘速度向細(xì)胞灌流槽分別灌流，同時(shí)使用整負(fù)壓吸引裝置將廢液從灌流槽中吸除。記錄方法為破膜后穩(wěn)定5分鐘記錄給藥前的電流值，給藥5分鐘后記錄藥物作用下的電流值。采樣后數(shù)據(jù)存貯在電腦硬盤(pán)內(nèi)，供測(cè)量及分析用。為消除細(xì)胞間誤差，電流值以電流密度(pA/pF)表示。

3.各電流刺激方案設(shè)定及觀察指標(biāo)

記錄IKI時(shí)刺激方案 維持電位(Vh)-40mV，指令電位-120mV~0mV,躍階10mV,鉗制時(shí)間400ms,刺激頻率0.2Hz。以測(cè)試電壓-100mV的IKI穩(wěn)態(tài)電流密度在用藥前后的變化作為觀察指標(biāo)。

記錄Ito電流電壓關(guān)系時(shí)刺激方案

維持電位(Vh)-90mV，先給予－40mV20ms前刺激，再給予-40mV~+60mV去極化刺激,躍階10mV,鉗制時(shí)間400ms,刺激頻率0.2Hz。以測(cè)試電壓60mV Ito峰值電流密度在用藥前后的變化作為觀察指標(biāo)。

記錄Ito穩(wěn)態(tài)失活的刺激方案 維持電壓－90mV,給予400ms從－120mV～60mV躍階10mV的前刺激，然后鉗制在60mV300ms記錄Ito電流，并比較用藥前后的變化。

2、哪些心律失?；颊哌m合服用參松養(yǎng)心膠囊？

無(wú)器質(zhì)性心臟病，但患者有心慌氣短、乏力、失眠癥狀伴或不伴早博，均可單獨(dú)用參松養(yǎng)心膠囊，一日3次、一次2-4粒。
有器質(zhì)性病變，如冠心病/心肌炎/心肌病/高血壓等合并各類(lèi)早博，早博并不重，可用參松養(yǎng)心膠囊既可以抗心律失常，又可以協(xié)助基礎(chǔ)藥物改善患者冠心病基礎(chǔ)病變。單獨(dú)應(yīng)用或聯(lián)合改善基礎(chǔ)病變的西藥應(yīng)用。一日3次、一次2-4粒。
西藥治療棘手的心律失常，如快慢綜合征，房室傳導(dǎo)阻滯伴早博，可以應(yīng)用參松養(yǎng)心膠囊。一日3次、一次2-4粒。
緩慢性心律失常，包括竇緩、房室傳導(dǎo)阻滯伴早搏、慢快綜合癥等，不僅改善患者的癥狀，而且提高患者的心率。
更年期綜合征、心臟神經(jīng)官能征、過(guò)度緊張、勞累、情緒、壓力及神經(jīng)衰弱等引起引起的心慌、氣短、乏力、失眠等癥狀。20、參松養(yǎng)心膠囊對(duì)哪些早搏（室早和房早）效果顯著

治療心律失常的藥物有哪些？哪些副作用??？

根據(jù)詞條的解釋?zhuān)穆墒С＃╝rrhythmia）是由于竇房結(jié)激動(dòng)異常或激動(dòng)產(chǎn)生于竇房結(jié)以外，激動(dòng)的傳導(dǎo)緩慢、阻滯或經(jīng)異常通道傳導(dǎo)，即心臟活動(dòng)的起源和（或）傳導(dǎo)障礙導(dǎo)致心臟搏動(dòng)的頻率和（或）節(jié)律異常。事實(shí)上，心律失常的病因主要有三種：第一種是情緒刺激：在日常生活中，如果壓力過(guò)大，導(dǎo)致情緒波動(dòng)，也可以引發(fā)心律失常；第二種是藥物因素：有些藥物如果使用不當(dāng)也可以引起心律失常，許多抗心律失常藥可以引起心律失常，如D受體阻滯劑、胺碘酮等，維生素C也可以引起心律失常。第三種是不良生活習(xí)慣：平時(shí)如果生活作息不規(guī)律以及不良的生活習(xí)慣，日積月累，也是會(huì)引發(fā)心律失常的。

事實(shí)上，從現(xiàn)在的情況來(lái)看，抗心律失常的藥物主要有四大類(lèi)，其中Ⅰ類(lèi)主要是用于阻斷心肌和心臟傳導(dǎo)系統(tǒng)的鈉通道，具有膜穩(wěn)定作用，減慢傳導(dǎo)速度；Ⅱ類(lèi)β受體阻滯藥，主要是為了抑制交感神經(jīng)興奮所致的起搏電流、降低自律性，減慢傳導(dǎo)性，藥物主要包括普萘洛爾、阿替洛爾、美托洛爾等；Ⅲ類(lèi)主要作用是延長(zhǎng)動(dòng)作電位時(shí)程藥，抑制多種鉀電流，藥物有胺碘酮；Ⅳ類(lèi)鈣通道阻滯藥，主要包括維拉帕米、地爾硫卓等。

事實(shí)上，不管是哪類(lèi)藥，都是有副作用的，我們不妨分別來(lái)介紹一下：

第一，Ⅰ類(lèi)的副作用主要是胃腸道反應(yīng)、低血壓、心動(dòng)過(guò)緩、傳導(dǎo)阻滯。

第二，Ⅱ類(lèi)的副作用是導(dǎo)致竇性心動(dòng)過(guò)緩，房室傳導(dǎo)阻滯，并可能誘發(fā)心力衰竭和哮喘、低血壓等。長(zhǎng)期應(yīng)用對(duì)脂質(zhì)代謝和糖代謝有不良影響，故高脂血癥、糖尿病患者應(yīng)慎用。突然停藥可產(chǎn)生反跳現(xiàn)象。

第三，Ⅲ類(lèi)的副作用主要是口干、惡心、腹脹、腹瀉、頭痛、頭暈等。靜注過(guò)快可出現(xiàn)血壓下降、心動(dòng)過(guò)緩，嚴(yán)重者可致心臟停搏。

第四，IV類(lèi)的不良反應(yīng)一般與劑量有關(guān)，比較常見(jiàn)的副作用有竇性心動(dòng)過(guò)緩、房窒傳導(dǎo)阻滯及Q-T間期延長(zhǎng)，少數(shù)患者發(fā)生甲狀腺功能亢進(jìn)或減退及肝壞死，個(gè)別患者出現(xiàn)間質(zhì)性肺炎或肺纖維化。

事實(shí)上，不管是哪類(lèi)抗心律失常的藥物，基本上都是有副作用的，畢竟“是藥三分毒”，由于心律失常的發(fā)生機(jī)制比較復(fù)雜，各種抗心律失常藥物的作用及副作用也多不相同。從這里來(lái)看，當(dāng)我們?cè)谶x擇藥物時(shí)，一定要做好全面的考慮，同時(shí)也應(yīng)該講究用藥的劑量及方法，才能取得預(yù)期應(yīng)有的效果。

參松養(yǎng)心膠囊取得過(guò)什么榮譽(yù)嗎？

2010年1月11日，國(guó)家科學(xué)技術(shù)獎(jiǎng)勵(lì)大會(huì)在人民大會(huì)堂隆重舉行，由吳以嶺院士主持，以嶺醫(yī)藥集團(tuán)、北京阜外醫(yī)院等承擔(dān)的國(guó)家科技部創(chuàng)新基金資助項(xiàng)目“參松養(yǎng)心膠囊治療心律失常應(yīng)用研究”獲得2009年度國(guó)家科技進(jìn)步二等獎(jiǎng)，系2009年度全國(guó)醫(yī)藥類(lèi)科技成果最高榮譽(yù)，這也是以嶺醫(yī)藥集團(tuán)自2000年以來(lái)第四次獲得國(guó)家大獎(jiǎng)。

參松養(yǎng)心膠囊之所以能獲得國(guó)家科技進(jìn)步二等獎(jiǎng)，是由于它在國(guó)內(nèi)首先開(kāi)展了中藥抗心律失常的循證醫(yī)學(xué)研究。循證醫(yī)學(xué)是近年來(lái)在世界范圍內(nèi)興起的最權(quán)威、客觀的藥物療效評(píng)價(jià)方法，它的研究特點(diǎn)是：大范圍、多樣本、隨機(jī)雙盲。通過(guò)循證醫(yī)學(xué)研究就能得出國(guó)際公認(rèn)的藥物療效，選出真正值得醫(yī)生和患者信賴(lài)的藥物。我國(guó)中藥開(kāi)展循證醫(yī)學(xué)研究的極少，應(yīng)該說(shuō)這項(xiàng)研究剛剛起步。參松養(yǎng)心膠囊抗心律失常循證醫(yī)學(xué)研究在全國(guó)各地36家大型綜合性三甲醫(yī)院中展開(kāi)，其中包括北京阜外心血管病醫(yī)院、首都醫(yī)科大學(xué)朝陽(yáng)醫(yī)院、南京醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院、山東大學(xué)齊魯醫(yī)院等，參與的醫(yī)學(xué)專(zhuān)家達(dá)500多名。研究結(jié)果表明，參松養(yǎng)心膠囊治療非器質(zhì)性室性早搏顯著優(yōu)于對(duì)照組，治療器質(zhì)性室性早搏顯著優(yōu)于西藥慢心律；治療陣發(fā)性房顫療效與西藥心律平相當(dāng)，并且對(duì)目前尚無(wú)有效藥物治療的緩慢性心律失常如竇緩、病竇、傳導(dǎo)阻滯、慢快綜合征等也具有較好療效，填補(bǔ)了緩慢性心律失常藥物治療的空白。這標(biāo)志著中藥在某些治療領(lǐng)域堪比西藥甚至超過(guò)西藥，并且長(zhǎng)期用藥安全。目前西藥治療心律失常存在的最大問(wèn)題就是它的毒副作用，而且許多藥物治療有效劑量與引發(fā)毒副反應(yīng)劑量非常相近，用不夠劑量控制不住心律失常，用足劑量有可能引發(fā)更嚴(yán)重的心律失常，甚至增加心血管病的死亡率。

參松養(yǎng)心膠囊的研究成功為眾多心律失?；颊咛峁┝税踩行幬?，為我國(guó)中成藥臨床研究起到了積極的示范作用，并向國(guó)內(nèi)外醫(yī)學(xué)界表明，中藥接受主流醫(yī)學(xué)科研方法評(píng)價(jià)，可以取得令人信服的療效，這對(duì)中藥現(xiàn)代化、國(guó)際化具有重大意義。

參松養(yǎng)心膠囊是以中醫(yī)絡(luò)病理論為指導(dǎo)開(kāi)發(fā)的治療心律失常的有效藥物，具有整合調(diào)節(jié)抗心律失常的特點(diǎn)，參松養(yǎng)心膠囊可以對(duì)鈉、鈣、鉀等多種心臟離子通道起到明顯的調(diào)節(jié)作用，可以改善心肌細(xì)胞代謝紊亂，調(diào)整心臟起搏傳導(dǎo)系統(tǒng)功能，調(diào)節(jié)心臟自主神經(jīng)功能，改善心肌供血。參松養(yǎng)心膠囊同時(shí)具備多離子通道阻滯與非離子通道調(diào)節(jié)的優(yōu)勢(shì)成為其臨床快慢兼治心律失常的電生理基礎(chǔ)。

參松養(yǎng)心膠囊是科技部創(chuàng)新基金資助項(xiàng)目、國(guó)家高技術(shù)產(chǎn)品、國(guó)家重點(diǎn)新產(chǎn)品。每年服用參松養(yǎng)心膠囊治療心律失常的患者達(dá)300萬(wàn)人以上。

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