人參總皂苷可誘導(dǎo)干細(xì)胞分化為心肌樣細(xì)胞

日前，廣州中醫(yī)藥大學(xué)的汪朝暉和該校第一附屬醫(yī)院的冼紹祥、楊忠奇等研究人員在承擔(dān)的一項國家自然科學(xué)基金資助項目中發(fā)現(xiàn)，人參總皂苷(GS)可體外誘導(dǎo)骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞（MSCs）分化為心肌樣細(xì)胞，為將中藥應(yīng)用于細(xì)胞移植領(lǐng)域提供了實驗依據(jù)。

隨著心肌梗死發(fā)生率逐年增高，如何替代壞死心肌，改善肌原性心衰，是當(dāng)今醫(yī)學(xué)研究的熱點。目前，為使心梗后心肌修復(fù)成為可能，國內(nèi)外學(xué)者多采用5-氮胞苷（5-aza）來誘導(dǎo)MSCs分化成心肌細(xì)胞。人參具有保護(hù)心肌的作用。在本實驗中，研究人員采用人參總皂苷進(jìn)行誘導(dǎo)MSCs向心肌樣細(xì)胞分化的研究，以揭示其治療心肌梗死的細(xì)胞生物學(xué)機(jī)制。

研究人員取成年大鼠骨髓細(xì)胞，采用密度梯度分離法與貼壁法結(jié)合獲取MSCs，進(jìn)行原代培養(yǎng)和克隆培養(yǎng)；采用流式細(xì)胞儀檢測細(xì)胞表面抗原CD34和CD44以鑒定該法所獲細(xì)胞是否為MSCs；對傳至第8代的MSCs進(jìn)行分組誘導(dǎo)，分別為Gs組(終末濃度為250毫克/升)、5-aza組(終束濃度為10微摩爾/升)、GS+5-aza組(終末濃度分別為250毫克/升、10微摩爾/升)，每組再分3個亞組，分別對MSCs進(jìn)行24、48、72小時誘導(dǎo)，并設(shè)空白對照組；采用共聚焦熒光顯微鏡觀察細(xì)胞數(shù)及陽性細(xì)胞數(shù)，計算心肌樣細(xì)胞轉(zhuǎn)化率；采用免疫組化法檢測分化的心肌樣細(xì)胞的特異性蛋白結(jié)蛋白和肌鈣蛋白，采用逆轉(zhuǎn)錄聚舍酶鏈反應(yīng)(RT-PCR)檢測誘導(dǎo)前后心肌細(xì)胞特征性基因α-心肌肌球蛋白重鏈和β-心肌肌球蛋白重鏈的表達(dá)。

結(jié)果顯示，分離培養(yǎng)后的細(xì)胞生長密集，形態(tài)呈紡錘狀，表面抗原鑒定為CD44表達(dá)陽性，表明所獲細(xì)胞為MSCs；經(jīng)Gs、5-aza以及Gs+5-aza誘導(dǎo)后，MSCs分化成類心肌細(xì)胞，3組的心肌樣細(xì)胞轉(zhuǎn)化率無顯著性差異(分別為38％、35％、39％)；免疫組化和RT-PCR檢測結(jié)果顯示特異性蛋白結(jié)蛋白和肌鈣蛋白、心肌肌球蛋白重鏈表達(dá)均陽性，陽性細(xì)胞呈梭形和成纖維細(xì)胞樣形態(tài)，表明MSCs在Gs體外誘導(dǎo)下已向心肌樣細(xì)胞轉(zhuǎn)化，并具有心肌樣細(xì)胞的特性。

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