HLA-Ⅱ類基因與狼瘡性器官的系統(tǒng)損害的相關(guān)性研究

摘　要　目的　分析HLA-Ⅱ類基因與狼瘡性器官、系統(tǒng)損害的相關(guān)性，探討系統(tǒng)性紅斑狼瘡(SLE)從基因到臨床表達(dá)的發(fā)病機(jī)制。方法　應(yīng)用PCR-SSOPH技術(shù)檢測(cè)113例確診SLE病人的DR、DQA1、DQB1等位基因。結(jié)果　漿膜炎與DQB1*0601正相關(guān)；神經(jīng)精神癥狀與DRB1*1501正相關(guān)；血肌酐增高與DQB1*0302、DQB1*0401正相關(guān)；血尿素氮增高與DQB1*0201負(fù)相關(guān)；蛋白尿與DQB1*0301、DRB3*0202、DRB3*0301、DRB1*1101負(fù)相關(guān)；血尿與DQB1*0301、DRB3*0301負(fù)相關(guān)；管型尿與DRB1*0302正相關(guān)；貧血和白細(xì)胞減少分別與DQB10201正相關(guān)；血小板減少與DRB1*1502和DRB1*1202正相關(guān)；淋巴細(xì)胞減少與DRB1*0302正相關(guān)；C3降低與DQB1*0303正相關(guān)，與DQB1*0301負(fù)相關(guān)；狼瘡細(xì)胞陽(yáng)性與DRB1*1501負(fù)相關(guān)。結(jié)論　多個(gè)HLA-Ⅱ類等位基因和SLE的臨床表達(dá)有相關(guān)性，國(guó)人的SLE遺傳背景與其他人種有所不同。

關(guān)鍵詞：紅斑狼瘡，系統(tǒng)性；HLA抗原；多態(tài)現(xiàn)象(遺傳學(xué))；易感性與特異性；等位基因

系統(tǒng)性紅斑狼瘡(SLE)發(fā)病與多種HLA等位基因相關(guān)。為深入探討這些基因或其關(guān)聯(lián)的亞型與SLE臨床表達(dá)關(guān)系，我們引入PCR-SSOPH檢測(cè)技術(shù)，對(duì)113例確診的SLE病人進(jìn)行HLA-DR、DQ位點(diǎn)等位基因分型，分析基因與狼瘡性器官、系統(tǒng)損害的相關(guān)性，找出重型SLE相關(guān)基因。

1　資料與方法

1.1　病例選擇：入選的113例患者均符合1982年美國(guó)風(fēng)濕病協(xié)會(huì)(ARA)SLE診斷標(biāo)準(zhǔn)4條或4條以上［1］。記錄患者的性別、發(fā)病年齡，以及有無(wú)以下SLE臨床表現(xiàn)：蝶型紅斑、盤狀損害、光敏、口腔潰瘍、關(guān)節(jié)炎、雷諾現(xiàn)象、狼瘡發(fā)、神經(jīng)精神癥狀、漿膜炎、血細(xì)胞減少、狼瘡腎炎和C3降低(＜0.8g/L)等。

標(biāo)本：外周靜脈血5ml(抗凝)。

1.2　實(shí)驗(yàn)方法：①基因組DNA的提?。蝴}析法。②DNA體外擴(kuò)增—聚合酶鏈反應(yīng)(PCR)。共有6對(duì)引物，其中AMP-B為DR位點(diǎn)擴(kuò)增的公用引物。③地高辛(DIG)—ddUTP3′末端標(biāo)記寡核苷酸探針雜交。

1.3　分型標(biāo)準(zhǔn)：以顯著影響生存率的惡性指標(biāo)作為重型SLE分型標(biāo)準(zhǔn)［2］。

1.4　統(tǒng)計(jì)學(xué)處理：χ2相關(guān)分析、多因素回歸分析和多項(xiàng)比較校正，以P＜0.05為具統(tǒng)計(jì)學(xué)顯著性。

2　結(jié)

果

2.1　HLA-Ⅱ類基因分型

2.1.1　等位基因分型結(jié)果：用12個(gè)DQA1探針檢出7個(gè)亞型，未檢出DQA1*0401；用15個(gè)DQB1探針檢出12個(gè)等位基因，未檢出DQB1*0504、*0603和*0604；用4個(gè)DR2探針檢出4個(gè)亞型：用4個(gè)DR52組探針檢出3個(gè)亞型，未檢出DRB3*0201；用8個(gè)DR52相關(guān)組探針?lè)殖?個(gè)亞型。

2.1.2　H-W吻合度檢測(cè)結(jié)果：在HLA-DQA1和DQB1座位上，基因型的期望值與觀察值很好吻合，分別P＞0.1和P＞0.5，說(shuō)明基因已達(dá)到遺傳平衡，本組病人可作為可靠的供研究的群體資料。

2.2　HLA-Ⅱ類等位基因與SLE器官、系統(tǒng)損害的相關(guān)性(見(jiàn)表1)

2.2.1　HLA-DQA1位點(diǎn)等位基因：DQA1*0101與淋巴細(xì)胞減少正相關(guān)；DQA1*0102與狼瘡細(xì)胞陽(yáng)性負(fù)相關(guān)；DQA1*0501與蛋白尿負(fù)相關(guān)，Pc(多項(xiàng)比較校正P值)＞0.05。

2.2.2　HLA-DQB1位點(diǎn)等位基因：HLA-DQB1*0201與貧血和白細(xì)胞減少正相關(guān)，與血尿素氮增高負(fù)相關(guān)；DQB1*0302與血肌酐增高正相關(guān)；DQB1*0303與C3降低正相關(guān)；DQB1*0401與血肌酐增高正相關(guān)；DQB1*0602與發(fā)病年齡正相關(guān)，均分別P＜0.05，Pc＞0.05。

DQB1*0301分別與蛋白尿和血尿負(fù)相關(guān)，分別P＜0.001和0.01，分別Pc＜0.05和Pc＞0.05；與C3降低負(fù)相關(guān)，分別P＜0.05和Pc＞0.05。DQB1*0601與漿膜炎正相關(guān)，分別P＜0.01，Pc＜0.05。

2.2.3　HLA-DR2組等位基因：DRB1*1501與神經(jīng)精神癥狀正相關(guān)，與狼瘡細(xì)胞陽(yáng)性負(fù)相關(guān)；DRB1*1502與血小板減少正相關(guān)，均分別P＜0.05，Pc＞0.05。

2.2.4　HLA-DR52組等位基因：DRB3*0202與蛋白尿負(fù)相關(guān)；DRB30301與蛋白尿和血尿均呈負(fù)相關(guān)，均分別P＜0.05，Pc＞0.05。

2.2.5　HLA-DR52相關(guān)組等位基因：DRB10302與淋巴細(xì)胞減少和管型尿正相關(guān)；DRB1*1101與蛋白尿負(fù)相關(guān)；DRB1*1202與血小板減少正相關(guān)，均P＜0.05，Pc＞0.05。

表1　HLA-DR和DQ等位基因與SLE臨床指標(biāo)的相關(guān)性

等位基因 臨床指標(biāo) N1/N2N3/N4χ2值 P值 Pc值

DQA1*0101淋巴細(xì)胞減少10/6416/49　4.450.03＋ ＞0.05

DQA1*0102狼瘡細(xì)胞陽(yáng)性15/25　2/11　8.040.013－ ＞0.05

DQA1*0501蛋白尿19/69　5/44　4.200.04－ ＞0.05

DQB1*0201貧血

5/5118/62　6.380.01＋ ＞0.05

白細(xì)胞減少

8/6515/48　6.110.01＋ ＞0.05

尿素氮增高16/51　1/11　7.000.03－ ＞0.05

DQB1*0301蛋白尿27/69　3/4414.390.0001－ ＜0.01

血尿29/90　1/23　7.300.007－ ＞0.05

C3降低20/51　9/55　7.660.02－ ＞0.05

DQB1*0302血肌酐增高 　7/554/7　8.840.01＋ ＞0.05

DQB1*0303C3降低10/5117/55　8.500.01＋ ＞0.05

DQB1*0401血肌酐增高 　1/552/7　8.810.01＋ ＞0.05

DQB1*0601漿膜炎21/99　8/14　8.300.03＋ ＜0.05

DRB1*1501CNS損害19/99　5/13　6.030.049＋ ＞0.05

狼瘡細(xì)胞陽(yáng)性11/25　0/1110.960.01－ ＞0.05

DRB1*1502血小板減少 　0/55　6/58　6.010.01＋ ＞0.05

DRB3*0202蛋白尿19/69　3/44　7.360.007－ ＞0.05

DRB3*0301蛋白尿12/69　2/44　4.080.04－ ＞0.05

血尿14/90　0/23　4.080.04－ ＞0.05

DRB1*0302淋巴細(xì)胞減少 　1/64　5/49　4.120.04＋ ＞0.05

管型尿 　4/1042/9　5.560.02＋ ＞0.05

DRB1*1101蛋白尿11/69　1/44　5.290.02－ ＞0.05

DRB1*1202血小板減少 　0/55　5/58　4.960.03＋ ＞0.05

注：N1：等位基因陽(yáng)性＋臨床指標(biāo)陰性數(shù)，N2：臨床指標(biāo)陰性數(shù)，N3：等位基因陽(yáng)性＋臨床指標(biāo)陽(yáng)性數(shù)，N4：臨床指標(biāo)陽(yáng)性數(shù)，－：負(fù)相關(guān)，＋：正相關(guān)

此外，本研究尚發(fā)現(xiàn)HLA-Ⅱ類基因與多種自身抗體顯著關(guān)聯(lián)，但與性別、蝶型紅斑、盤狀損害、光敏、口腔潰瘍、關(guān)節(jié)炎、雷諾現(xiàn)象和狼瘡發(fā)無(wú)顯著相關(guān)。

2.2.6　多因素回歸分析：結(jié)果表明等位基因相互間存在復(fù)雜的交互關(guān)系，DQB1*0401和DQB1*0605分別與血肌酐增高和蛋白尿正相關(guān)，分別P＜0.05。

3　討

論

為探討基因與SLE臨床表達(dá)關(guān)系，找出重型SLE相關(guān)基因，我們進(jìn)一步分析了HLA-Ⅱ類基因與狼瘡性器官、系統(tǒng)損害的相關(guān)性。

3.1　腎臟損害：Fronek等［3］報(bào)道DR2與狼瘡腎炎相關(guān)，還發(fā)現(xiàn)稀有等位基因DQB1*0605、*0502與白人、黑人和亞洲人狼瘡腎炎顯著相關(guān)，此相關(guān)在亞洲人最顯著。Doherty等［4］報(bào)道了對(duì)南方中國(guó)人SLE的研究結(jié)果：與健康對(duì)照組比，DRw15和DQw1在狼瘡腎炎組頻率顯著增高：與非狼瘡腎炎組比，頻率無(wú)明顯增高；王敏等［5］報(bào)道，DR2和DR9同時(shí)陽(yáng)性可致狼瘡腎炎風(fēng)險(xiǎn)性明顯增高；彭學(xué)標(biāo)等［6］的研究結(jié)果也表明DR2陽(yáng)性與江蘇地區(qū)漢族人SLE腎損害相關(guān)；但未見(jiàn)分析DR2亞型相關(guān)性的報(bào)道。我們的研究結(jié)果提示DQB1*0401和DQB1*0302均與血肌酐增高相關(guān)；其中DQB1*0401經(jīng)多因素回歸分析保持顯著意義，因此是較為肯定的重型SLE相關(guān)基因；此外，單因素分析結(jié)果未顯示DQB1*0605與腎損害相關(guān)，但多因素回歸分析結(jié)果顯示其與蛋白尿關(guān)聯(lián)；由于DQB1*0605是稀有基因，顯然不能用它解釋SLE患者如此高的腎炎發(fā)生率；推測(cè)DQB1*0605與其他更重要的關(guān)聯(lián)基因一起介導(dǎo)狼瘡性蛋白尿的發(fā)生與發(fā)展。我們的研究未發(fā)現(xiàn)單位點(diǎn)DR2等位基因與腎損害關(guān)聯(lián)，它們是否通過(guò)與其他基因的組合而致腎炎易感，有待進(jìn)一步研究。

本資料還顯示DQB1*0303與C3降低正相關(guān)。C3在自身免疫反應(yīng)過(guò)程中起關(guān)鍵性作用，對(duì)腎炎的發(fā)生與發(fā)展尤為重要，早期C3降低是獨(dú)立影響SLE病人預(yù)后的惡性因素［2］。因此DQB1*0303是個(gè)重要的SLE相關(guān)基因，值得進(jìn)一步探討它對(duì)SLE的標(biāo)記性。

本研究發(fā)現(xiàn)某些等位基因?qū)钳從I炎具有保護(hù)性，包括DQB1*0201和*0301，分別與血尿素氮和蛋白尿負(fù)相關(guān)；其中DQB1*0301還與惡性指標(biāo)C3降低負(fù)相關(guān)；文獻(xiàn)［7］報(bào)道DQB1*0301與SLE易感相關(guān)，但它可能是中國(guó)南方漢族人輕型SLE相關(guān)基因。

此外，DRB3*0202(DRw52b)、*0301(DRw52c)也與蛋白尿負(fù)相關(guān)。這與Reveille等［8］報(bào)道的美國(guó)黑人DRw52b與狼瘡腎炎高風(fēng)險(xiǎn)關(guān)聯(lián)相反。這種差異顯然與人種的遺傳背景有關(guān)。我們推測(cè)DR52組等位基因單獨(dú)不能決定狼瘡腎炎，但它們與重要的狼瘡腎炎相關(guān)基因呈連鎖不平衡，通過(guò)組合而呈現(xiàn)不同的功能：與致腎炎基因連鎖，功能顯示致病性；與保護(hù)性基因連鎖，顯示保護(hù)性。

孟煒等［9］報(bào)道DQA1*0501是SLE的保護(hù)基因，本資料也提示DQA1*0501與狼瘡腎炎低風(fēng)險(xiǎn)相關(guān)。這與國(guó)外報(bào)道DQA1*0501為SLE易感基因不一致。

我們先前生存率的研究結(jié)果顯示男性是獨(dú)立影響SLE病人預(yù)后的惡性因素，男性比女性更多出現(xiàn)管型尿［2］。但本研究未發(fā)現(xiàn)HLA-Ⅱ類基因在男女性之間的分布有差異。在鼠狼瘡，Yaa基因(Y染色體自身免疫反應(yīng)促進(jìn)基因)可顯著加速狼瘡易感鼠發(fā)?。?0］，且狼瘡腎炎嚴(yán)重；在人狼瘡，是否存在具有類似功能的基因，值得深入探討。

3.2　中樞神經(jīng)系統(tǒng)損害：本研究發(fā)現(xiàn)DRB1*1501與SLE患者的神經(jīng)精神癥狀正相關(guān)，這在國(guó)內(nèi)外未見(jiàn)有報(bào)道。Reveille等［8］的研究結(jié)果提示3.7kb I DQαRFLP片斷與黑人SLE的神經(jīng)精神癥狀負(fù)相關(guān)，并推測(cè)具有保護(hù)功能的序列在DQα分子鏈上。本研究結(jié)果未能支持這一論點(diǎn)。

3.3　血液系統(tǒng)損害：DQA1*0101與淋巴細(xì)胞減少相關(guān)，未見(jiàn)其他可比性資料供討論。DQB1*0201與貧血和白細(xì)胞減少關(guān)聯(lián)。值得注意的是DQB1*0201同時(shí)與血尿素氮增高呈強(qiáng)負(fù)性關(guān)聯(lián)，表明該基因主要引起血液系統(tǒng)損害。臨床上某些SLE病人以血液系統(tǒng)受累為主要表現(xiàn)，如嚴(yán)重貧血、血小板減少等，而其他系統(tǒng)損害輕或無(wú)，可能與攜帶DQB1*0201基因型有關(guān)。

3.4　漿膜炎：本研究結(jié)果顯示DQB1*0601與漿膜炎正相關(guān)，是重型SLE相關(guān)基因。文獻(xiàn)［1］報(bào)道DQB1*0601是SLE易感基因。

本文研究分析HLA-Ⅱ類基因與狼瘡性器官、系統(tǒng)損害的相關(guān)性，發(fā)現(xiàn)DR和DQ位點(diǎn)均有多個(gè)等位基因與SLE臨床指標(biāo)關(guān)聯(lián)，部分顯示易感性，部分顯示保護(hù)性。結(jié)果對(duì)區(qū)分SLE臨床亞型，早期預(yù)測(cè)SLE發(fā)展趨勢(shì)具有一定的參考意義。研究結(jié)果表明，重型SLE相關(guān)基因主要為DQA1*0101、DQB1*0201、DQB1*0302、DQB1*0303、DQB1*0401、DQB1*0601和DRB1*1501，對(duì)SLE具有保護(hù)性作用的基因包括DQA1*0501、DQB1*0301、DRB3*0202和DRB3*0301等。

謝尚葵現(xiàn)為美國(guó)德克薩斯大學(xué)西南醫(yī)學(xué)中心風(fēng)濕病科博士后

作者單位：謝尚葵(200040上海醫(yī)科大學(xué)華山醫(yī)院皮膚科)

馮樹(shù)芳(200040上海醫(yī)科大學(xué)華山醫(yī)院皮膚科)

沈福民(上海醫(yī)科大學(xué)公共衛(wèi)生學(xué)院遺傳流行病學(xué)教研室)

參考文獻(xiàn)

1.Tan EM,Cohen AS,Fries JF,et al.The1982revised criteria for the classification of systemic lupus erythematosus.Arthritis Rheum,1982,25:1271-1277.

2.謝尚葵，馮樹(shù)芳，傅華.系統(tǒng)性紅斑狼瘡病人生存率的研究.中華醫(yī)學(xué)雜志，1995，75：617-620.

3.Fronek Z,Timmerman L,Alper C,et al.Major histocompatibility complex genes and susceptibility to systemic lupus erythematosus.Arthritis Rheum,1990,33:1542-1553.

4.Doherty DG,Ireland R,Demaine AG,et al.Major histocompatibility complex genes and susceptibility to systemic lupus erythematosus in Southern Chinese.Arthritis Rheum,1992,35:641-645.

5.王敏，董怡，黃尚志，等.中國(guó)漢人HLA-DRB1及TNF-α基因多態(tài)性與SLE遺傳易感性的研究.見(jiàn)：中華醫(yī)學(xué)會(huì)風(fēng)濕病學(xué)學(xué)會(huì).中華醫(yī)學(xué)會(huì)第五次全國(guó)風(fēng)濕病學(xué)學(xué)術(shù)會(huì)議論文集.北京：中華醫(yī)學(xué)會(huì)風(fēng)濕病學(xué)學(xué)會(huì)，1996.46-52.

6.彭學(xué)標(biāo)，徐文嚴(yán)，岳曉玉，等.江蘇籍漢族系統(tǒng)性紅斑狼瘡與HLA-DR基因的相關(guān)性研究.中華皮膚科雜志，1997，30：7-9.

7.Arnett FC,Olsenml,Anderson KL,et al.Molecular analysis of major histocompatibility complex alleles associated with the lupus anticoagulant.J Clin Invest,1991,87:1490-1495.

8.Reveille JD,Schrohenloher R,Acton RT,et al.DNA analysis of HLA-DR and DQ genes in American black with systemic lupus erythematosus.Arthritis Rheum,1989,32:1243-1251.

9.孟煒，沈福民，秦萬(wàn)章，等.中國(guó)南方漢族人群HLA-DQA1基因與系統(tǒng)性紅斑狼瘡易感性分析.中華醫(yī)學(xué)遺傳雜志，1994，11：325-328.

10.Izui S,Iwamoto M,Fossatl L,et al.The Yaa gene model of systemic lupus erythematosus.J Immunol,1995,144:137-153.

11.張咸寧，潘新華，朱定良，等.中國(guó)南方漢族人群HLA-DQB1基因?qū)ο到y(tǒng)性紅斑狼瘡的易感性研究.中國(guó)免疫學(xué)雜志，1997，1：37-39.

本文地址:http://www.soujuw.cn/zhongyizatan/62258.html.

聲明： 我們致力于保護(hù)作者版權(quán)，注重分享，被刊用文章因無(wú)法核實(shí)真實(shí)出處，未能及時(shí)與作者取得聯(lián)系，或有版權(quán)異議的，請(qǐng)聯(lián)系管理員，我們會(huì)立即處理，本站部分文字與圖片資源來(lái)自于網(wǎng)絡(luò)，轉(zhuǎn)載是出于傳遞更多信息之目的,若有來(lái)源標(biāo)注錯(cuò)誤或侵犯了您的合法權(quán)益，請(qǐng)立即通知我們(管理員郵箱：602607956@qq.com)，情況屬實(shí)，我們會(huì)第一時(shí)間予以刪除，并同時(shí)向您表示歉意,謝謝!

上一篇: 生物醫(yī)學(xué)工程回顧與展望

下一篇: 腰椎間盤突出癥膠原酶治療進(jìn)展