本世紀(jì)初Ehrilich曾提出用抗體導(dǎo)向治療腫瘤的設(shè)想,并稱(chēng)之為魔彈。近一個(gè)世紀(jì)來(lái),人們不斷努力,反復(fù)實(shí)驗(yàn),但這一設(shè)想一直沒(méi)有很發(fā)實(shí)現(xiàn)。自1976年單克隆抗體技術(shù)問(wèn)世以來(lái),人們又燃起了應(yīng)用魔彈治療腫瘤的希望,理由是抗腫瘤單克隆抗體更加特異,抗原決定簇明確,可以大量生產(chǎn),可能更適合于導(dǎo)向治療。進(jìn)入八十年代,我國(guó)就有許多實(shí)驗(yàn)室 進(jìn)行胃癌單克隆抗體的制備工作,是很艱苦的工作,不一定能堅(jiān)持下來(lái)。但是有些實(shí)驗(yàn)室從胃癌單克隆抗體的制備,到最后用于臨床診斷和治療,通過(guò)不斷努力,做出了很好的成績(jī)。若要實(shí)現(xiàn)腫瘤的導(dǎo)向治療,而且卓有成效,必須經(jīng)以下幾個(gè)關(guān)鍵步驟。單克隆抗體的制備
目前單克隆抗體的制備多采取細(xì)胞融合的方法。國(guó)內(nèi)外產(chǎn)生胃癌單克隆抗體也是 采取 這個(gè)辦法。但要得到特異性好,效價(jià)高及親合力強(qiáng)的抗體,還必須采取許多措施。首先在選擇抗原上下功夫。樊代明、張學(xué)庸等所制備的MG系列胃癌單克隆抗體時(shí),避免單純用細(xì)胞系,因?yàn)榧?xì)胞系經(jīng)過(guò)長(zhǎng)期培養(yǎng)總要丟掉某些抗原,而采用新鮮標(biāo)本可以彌補(bǔ)這個(gè)問(wèn)題。他們用手術(shù)切除的新鮮胃癌標(biāo)本結(jié)合細(xì)胞系,原發(fā)病灶的細(xì)胞與轉(zhuǎn)移病灶的細(xì)胞并用,這樣容易得到不同的抗原決定簇的單克隆抗體,因而得到的MG系列有較多的類(lèi)型。同時(shí)他們制備篩選了大量抗體,從幾十個(gè)雜交瘤細(xì)胞中精選出來(lái)幾株高效價(jià),高親合力的,穩(wěn)定分泌的細(xì)胞株,組成MG系列。
第二個(gè)必要的措施是要選擇一種好的篩選抗體的方法。常用的篩選辦法是酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)(ELISA)及免疫組織化學(xué)的方法。從目前來(lái)看,以后者為好,它的優(yōu)點(diǎn)是組織切片中抗原成分很復(fù)雜,抗體與何種細(xì)胞成分反應(yīng),一旦了然,如胃癌單克隆抗體,只應(yīng)同胃癌細(xì)胞反應(yīng),若是其它細(xì)胞成分也反應(yīng),如果不是非特異染色,就是抗原成分交叉,即有共同抗原??梢詫⒎翘禺惾旧徒徊娣磻?yīng)的抗體丟掉,只留下較特異的抗體,所以用免疫組化篩選的效果全面而徹底,得到的信息多。在免疫組織化學(xué)的方法中,以ABC法比較敏感,即使反應(yīng)較弱的抗體也能顯示出來(lái)。免疫熒光間接法,用起來(lái)也很方便,但敏感性差一些,兩者都能節(jié)省時(shí)間。在篩選時(shí)還有一個(gè)問(wèn)題城要注意,就是石蠟切片與冰凍切片枯一定情況下都要使用。篩選抗體時(shí)用石蠟切片,可以選出效價(jià)高,能在石蠟切片上染色的抗體。但是石蠟切片經(jīng)過(guò)了酒精及二甲苯脂溶劑的處理,脂性抗原已經(jīng)去掉,所以與脂溶性抗原有關(guān)的抗體不能篩選出來(lái)。在確定抗體與那些組織有交叉反應(yīng)時(shí),則必須用冰凍切片,因?yàn)楸鶅銮衅?,抗原未丟失,若無(wú)交叉反應(yīng),才是真正的沒(méi)有交叉,所以用石蠟切片檢測(cè)抗體有無(wú)與其它組織反應(yīng)是不可靠的。單克隆抗體的特異性
單克隆抗體能在人體應(yīng)用有效,必須有較高的特異性及親合力。
首先必須與大多數(shù)胃癌標(biāo)本切片中的胃癌細(xì)胞呈陽(yáng)性反應(yīng)。如能對(duì)其中多數(shù)細(xì)胞和各種類(lèi)型的胃癌都起陽(yáng)性反應(yīng)則更好。MG系列的鼠鼠抗體對(duì)各種不同分化的胃癌陽(yáng)性率為67%~100%,PCI抗體對(duì)胃癌的結(jié)合力是比較強(qiáng)的。
另一個(gè)檢測(cè)特異性的辦法是將抗體用核素標(biāo)記后注入帶人胃癌的裸鼠中,觀察有關(guān)抗體是否向人腫瘤中濃集。如將胃癌的單抗MGb2結(jié)合131I后,給荷人胃癌裸鼠注射,則可在體外顯像。在注射后第7天時(shí),瘤正常組織的放射比為16.22,說(shuō)明抗體可在胃癌中濃集16倍。同時(shí)可結(jié)合131Imgb抗體注入后,腫瘤生長(zhǎng)慢,瘤組織中呈大片壞死,而空白對(duì)照,單純抗體的對(duì)照組腫瘤生長(zhǎng)快,分裂相多而極少壞死。
在體外也可將抗體交聯(lián)抗癌藥物,加入胃細(xì)胞的培養(yǎng)系統(tǒng)中,以觀察抗體結(jié)合藥物后比單純藥物或單純抗體有更強(qiáng)的導(dǎo)向殺傷作用。對(duì)殺傷的細(xì)胞的檢測(cè),過(guò)去都用Cr51釋放,3HTdr 摻入等方法,現(xiàn)在多用噻唑蘭(MTT)的方法,此法不用核素,比較完全,準(zhǔn)確度也不差。當(dāng)然抗體在荷人腫瘤的裸鼠中能濃集,所以殺傷腫瘤作用也不明顯。因?yàn)閱慰寺】贵w由鼠產(chǎn)生,對(duì)鼠的組織不發(fā)生反應(yīng),只對(duì)所帶人的腫瘤反應(yīng),所以這種濃集是順理成章的,但當(dāng)人用時(shí),各種人的組織難免在抗原性上與人的胃癌有交叉反應(yīng),所以濃集起來(lái)就困難得多。
當(dāng)然檢測(cè)單克隆抗體特異性的指標(biāo)還有許多,如在免疫電鏡下看標(biāo)記抗體是否能特異地與胃癌細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)結(jié)合或向細(xì)胞內(nèi)轉(zhuǎn)移(內(nèi)化);還可以檢測(cè)抗體的親合力。單克隆抗體人體內(nèi)應(yīng)用
單克隆抗體的應(yīng)用很多,如用它作免疫組織化學(xué)的試劑,進(jìn)行病理診斷,用它裝備ELISA試劑盒進(jìn)行胃癌血清學(xué)診斷等。這些在MG系列及其它系列的胃癌單克隆抗體都有所報(bào)道。但是這里講的是如何把特異性好,在荷人腫瘤的裸鼠中能定位人的胃癌的抗體用于病人的診斷與治療。這種診斷與治療被稱(chēng)為導(dǎo)向診斷及導(dǎo)向治療。
單克隆抗體用于人體前,必須進(jìn)行一些檢查:①無(wú)熱源;②作急性毒試驗(yàn),如給小鼠尾靜脈注射時(shí),不發(fā)生死亡或病變等。并經(jīng)自愿者受試,不出現(xiàn)不良反應(yīng),然后可申報(bào)衛(wèi)生部批準(zhǔn)進(jìn)行臨床病人應(yīng)用。達(dá)到國(guó)家生物制品鑒定部門(mén)的標(biāo)準(zhǔn),經(jīng)過(guò)在指定的醫(yī)院進(jìn)行Ⅱ期,Ⅲ期臨床試驗(yàn)后,方能批準(zhǔn)在市場(chǎng)上出售。目前MG系列及PC系列均能 在病人身上用其核素標(biāo)記的抗體進(jìn)行顯像,作為腫瘤的診斷,也可用來(lái)進(jìn)行實(shí)驗(yàn)治療,但尚未取得明確的療效報(bào)告。PC系列研制的產(chǎn)品在手術(shù)時(shí)可批示胃癌病灶或轉(zhuǎn)移病灶的部位,作為手術(shù)導(dǎo)向。人用鼠抗體存在的問(wèn)題
目前大部分單克隆抗體是鼠鼠細(xì)胞融合而成的,抗體本質(zhì)上是鼠的免疫球蛋白。人用后,它可作為抗原使人體產(chǎn)生抗鼠的抗體,人抗鼠抗體很快與注入的鼠抗體發(fā)生作用,使鼠抗體很快失效清除。而鼠抗體對(duì)人來(lái)說(shuō)是異種蛋白,容易發(fā)生過(guò)敏,所以目前要用鼠抗體,必須將其 進(jìn)行改造。一種辦法是由胃 蛋白酶消化鼠抗體使之成為F(Ab)2,這樣保留其與抗原作用的可變區(qū),去除容易誘發(fā)過(guò)敏及抗體產(chǎn)生的FC段,這樣一來(lái),產(chǎn)生人抗鼠抗體的機(jī)會(huì)就少一些。
目前大家都注意用基因工 程改造鼠抗體 的方法。因?yàn)橛萌巳穗s交瘤 產(chǎn)生人的單克隆抗體十分困難。解決的辦法有兩個(gè),一是從病人的淋巴細(xì)胞中單克隆抗腫瘤的抗體基因,表達(dá)的抗體就是人的抗體;另一辦法是對(duì)鼠抗體進(jìn)行基因工程改造,例如可從鼠抗腫瘤單克隆抗體細(xì)胞系中提出其RNA,反轉(zhuǎn)錄成cNDA,用PCR擴(kuò)增,克隆出其輕鏈及重鏈的可變基因,把這種基因在真核細(xì)胞或載體中表達(dá)出來(lái)的一種或可變區(qū)蛋白,即是一種抗腫瘤的小抗體,或者把這種小抗體的基因與人的FC段的基因聯(lián)接,組成一個(gè)嵌合基因,可變區(qū)仍是鼠的,恒定區(qū)是人的,將來(lái)表達(dá)一種嵌合抗體。也有把輕鏈可變區(qū)基因與重鏈可變區(qū)聯(lián)接一條單鏈的抗體,這三條抗體為單鏈抗體、嵌合抗體、小抗體都可試用于臨床,看有無(wú)活性及診斷和治療效果。
另外的辦法是將抗腫瘤抗體的輕重鏈可變區(qū)基因與另一個(gè)效應(yīng)基因聯(lián)接,如把腫瘤壞死因子基因,CD8的基因或白細(xì)胞介素2-的基因與抗體基因聯(lián)接,試圖既發(fā)揮抗體的導(dǎo)向作用,又發(fā)揮使腫瘤發(fā)生壞死的腫瘤壞死因子的作用,這些改變是人們正在研究的,以達(dá)到鼠抗體人化目的的一些辦法
胃癌的治療與其他惡性腫瘤的治療相同,均應(yīng)將手術(shù)治療作為首選的方法,同時(shí)根據(jù)情況合理的配合化療、放療、中醫(yī)中藥和免疫治療等綜合治療。 根據(jù)TNM分期,當(dāng)前采用綜合治療方案,大致如下。 I期胃癌屬于早期胃癌,主要以手術(shù)切除為主。對(duì)個(gè)別Ⅱa十Ⅱc型侵及粘膜下層,淋巴結(jié)出現(xiàn)轉(zhuǎn)移者,應(yīng)配合一定化療。 Ⅱ期胃癌屬于中期胃癌,主要以手術(shù)切除為主。有的輔助化療或免疫療法。 Ⅲ期胃癌多侵及周?chē)M織并出現(xiàn)較廣泛淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移,雖以手術(shù)切除為主,但應(yīng)配合化療、放療、免疫治療和中醫(yī)中藥治療。 Ⅳ期胃癌已屬晚期,多采用非手術(shù)療法,有適于手術(shù)者盡量切除原發(fā)與轉(zhuǎn)移病灶,配合化療、放療、免疫、中醫(yī)中藥綜合療法。 對(duì)于治療期間輔以中醫(yī)藥如亞克RH2是可以控制病情,增強(qiáng)療效
胃癌的治療方法可以通過(guò)手術(shù)化療以及放療的方式抑制身體內(nèi)癌細(xì)胞的擴(kuò)散,胃癌通常是由于感染了幽門(mén)螺桿菌,或者是飲食上的不當(dāng),以及胃酸分泌不足等各方面的原因而導(dǎo)致的,通常會(huì)出現(xiàn)腹部疼痛,惡心嘔吐,以及黑便嘔血等情況的發(fā)生,在治療期間一定要密切觀察身體的狀況。胃癌的治療方式包括手術(shù)、化療、放療、中藥免疫、基因靶向治療等綜合治療。1、手術(shù)是傳統(tǒng)的外科手術(shù),就是把腫瘤胃切掉一半,腔脛底下的手術(shù)是治療方法之一。如果是早期的胃癌,可以通過(guò)外鏡把腫瘤剝離掉,這也是一種治愈性的手段。2、進(jìn)展期的胃癌需要手術(shù)后追加化療、放療。3、有的病人還需要輔助中藥治療。中藥可以讓病人全身抵抗力強(qiáng)一點(diǎn),讓患者安全渡過(guò)治療。4、免疫治療可提高病人的機(jī)體免疫力。5、還有的病人需要通過(guò)基因靶向治療,也就是通過(guò)綜合治療手段把癌細(xì)胞殺死,讓患者的機(jī)體免疫力進(jìn)一步提高,進(jìn)而提高患者生存期。
胃癌的治療與其他惡性腫瘤的治療相同,均應(yīng)將手術(shù)治療作為首選的方法,同時(shí)根據(jù)情況合理的配合化療、放療、中醫(yī)中藥和免疫治療等綜合治療。
根據(jù)TNM分期,當(dāng)前采用綜合治療方案,大致如下。
I期胃癌屬于早期胃癌,主要以手術(shù)切除為主。對(duì)個(gè)別Ⅱa十Ⅱc型侵及粘膜下層,淋巴結(jié)出現(xiàn)轉(zhuǎn)移者,應(yīng)配合一定化療。
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?、羝谖赴┮褜偻砥冢嗖捎梅鞘中g(shù)療法,有適于手術(shù)者盡量切除原發(fā)與轉(zhuǎn)移病灶,配合化療、放療、免疫、中醫(yī)中藥綜合療法。
(一)手術(shù)治療 手術(shù)治療分為根治性手術(shù)、姑息性手術(shù)和短路手術(shù)。
1.根治性手術(shù)切除:此概念是相對(duì)的,指從主觀判斷認(rèn)為腫瘤已被切盡,可以達(dá)到治療的效果,實(shí)際上只有一部分能達(dá)到治愈。
2.姑息性切除:指主觀上判斷腫瘤已不可能完全切除,但主要的瘤塊可切除,切除腫瘤可解除癥狀,延長(zhǎng)壽命,為進(jìn)一步綜合治療創(chuàng)造條件。
3.短路手術(shù):主要用于已不可能手術(shù)切除的伴有幽門(mén)梗阻的病例,作胃空腸吻合術(shù)可緩解梗阻。
(二)放射治療
1.術(shù)前放療:指對(duì)某些進(jìn)展期胃癌,臨床上可摸到腫塊,為提高切除率而進(jìn)行的術(shù)前局部照射。每次200cGY,5次/周,共4周,總量為4000cGY。停止放療后lo一14d行手術(shù)。可增加局部切除率,但不能影響淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的程度,術(shù)前費(fèi)時(shí)6周。因此對(duì)5年生存的影響難以估價(jià)。
2.術(shù)中放療:指腫瘤切除后建立胃腸吻合前,針對(duì)以腹腔動(dòng)脈為中心的術(shù)野進(jìn)行一次大劑量照射,以3000~3500cGY為宜。對(duì)進(jìn)展期胃癌可提高5年生存率約10%。術(shù)中確保將腸道隔離在照射野外,防止放射性并發(fā)癥的發(fā)生。
3.術(shù)后放療:多數(shù)學(xué)者認(rèn)為無(wú)效。
(三)化療 早期胃癌可不用化療外,其他進(jìn)展期胃癌均應(yīng)適當(dāng)化療。
1.周身化療:臨床上決定化療方案。首先考慮腫瘤病理類(lèi)型、部位、病期等因素。胃癌多為腺癌,常選用5-FM、MMC、ADM、MeCCNu等藥物。術(shù)后第一年應(yīng)作三個(gè)療程,每療程約2個(gè)月,休息2個(gè)月后作第二療程。第二三年每年作二個(gè)療程,第四五年每年作一個(gè)療程,五年后可不必化療。
常用化療方案:
(1)FAM:5-Fu 500mg iv d1d8d15
ADM 30-50mg iv d1
MMC 4-10mg iv d1
21天為一周期。
2.腹腔化療:可術(shù)后腹腔置管或腹腔埋置化療泵及插管化療。增加局部濃度。
(四)免疫療法 免疫治療與化療并用,可延長(zhǎng)患者生命。常用干擾素、IL-2、BCG等藥物。
(五)中醫(yī)中藥治療 以扶正為主??蓪?duì)抗放療副作用,提高白細(xì)胞、血小板,調(diào)整胃腸功能,提高機(jī)體抵抗力。
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