摘 要
研究了從銀杏葉中提取總黃酮甙和萜內(nèi)酯等有效成分的4種方法,即(1)水提-醇沉-酯萃法;(2)丙酮-鹽水-提取法;(3)醇提-酯萃法;(4)乙醇提取-樹脂吸附法。其中方法(3)和(4)已經(jīng)中試,提取物總黃酮質(zhì)量分?jǐn)?shù)分別為26.20%、31.62%。萜內(nèi)酯質(zhì)量分?jǐn)?shù)為6%,達(dá)到德國同類產(chǎn)品質(zhì)量要求.
關(guān)鍵詞
銀杏葉;提?。豢傸S酮
我國是銀杏的故鄉(xiāng),擁有世界70%以上的儲(chǔ)量,湖北、江蘇、江西,浙江、山東等省是我國銀杏主要產(chǎn)地。關(guān)于銀杏的藥用價(jià)值,我國古代就有記載?,F(xiàn)代醫(yī)學(xué)研究證明[1,2],銀杏葉中的黃酮甙和萜內(nèi)酯,對(duì)心腦血管疾病有卓越的治療效果,對(duì)老年性癡呆也療效明顯。我國以銀杏提取物為原料制成的藥物制劑、保健食品、化妝品,行銷國內(nèi)外市場,年銷售額達(dá)到20~40億美元。
銀杏葉中含有多種成分,包括總黃酮甙類、萜類、烴基酚類,多烯醇類以及生物堿、糖、淀粉、蛋白質(zhì)和無機(jī)鹽。上述成分很多性質(zhì)相近,分離純化十分困難,國內(nèi)外均采取從銀杏葉中分離出總黃酮甙和總萜內(nèi)酯等有效成分,一般采用溶劑萃取、樹脂或活性炭吸附、沉淀分離等步驟。最近出現(xiàn)的超臨界萃取法是一很有發(fā)展前途的新方法。
筆者以湖北安陸的銀杏葉為原料,參考國內(nèi)外文獻(xiàn)[3~5]研究了4種提取方法:
(1)水提-醇沉-酯萃法;
(2)丙酮-鹽水-提取法;
(3)醇提-酯萃法;
(4)乙醇提取-
樹脂吸附法;對(duì)方法(3)、(4)進(jìn)行了擴(kuò)大試驗(yàn),提取物總黃酮甙質(zhì)量分?jǐn)?shù)39.83%,萜內(nèi)酯≥6%,達(dá)到了德國Schwabe 公司生產(chǎn)的EGB761銀杏葉標(biāo)準(zhǔn)提取物的要求。
1 實(shí)驗(yàn)部分
1.1 試驗(yàn)原料及儀器
銀杏葉:產(chǎn)地湖北安陸(干葉);樹脂:大孔樹脂D101、D201,天津南開大學(xué)附屬工廠生產(chǎn);乙醇,乙酸乙酯均為工業(yè)級(jí)。
GILSON715型高效液相色譜儀,法國吉爾森公司;HP8452二極管陣列分光光度計(jì),美國惠普公司。
1.2 實(shí)驗(yàn)方法及步驟
1.2.1 醇提-酯萃法 稱取干銀杏碎葉200g,置于圓底燒瓶中,分別加入適量水、乙醇溶劑,回流2~3h,過濾,合并濾液用旋轉(zhuǎn)薄膜蒸發(fā)器回收溶劑。溶劑回收率90%~95%,得濃縮浸膏,加入去離子水,冷凍除渣,重復(fù)3次,合并清液,用乙酸乙酯萃取,合并酯液,回收乙酸乙酯,得黃色粉狀產(chǎn)品,結(jié)果見表1之(3)。
1.2.2 醇提-樹脂吸附法 稱取干銀杏碎葉200g,加入質(zhì)量分?jǐn)?shù)50%的乙醇在室溫下滲漏,過濾滲漏液,回收乙醇得棕色流膏71.7g,加入去離子水100ml,用石油醚(或乙醚)萃取2~3次,以除去葉綠素,用氨水調(diào)pH值至8~9,用去離子水調(diào)至一定濃度倒入樹脂柱中吸附、分離,用不同濃度的洗脫液洗脫,收集洗脫液,減壓濃縮,得黃色粉末2.5g;平均結(jié)果見表1之(4)。
表1 4種黃酮類提取方法的比較
序號(hào)提取方法w(黃酮類化合物)/%回收率/%外 觀(1)水提-醇沉-酯萃法15.000.68黃灰色粉未(2)丙酮-鹽水-提取法20.052.00棕色粉未(3)醇提-酯萃法26.201.90黃褐色粉未(4)乙醇提取樹脂吸附法31.621.25淡黃色粉未2 結(jié)果與討論
2.1 結(jié)果比較
從表1結(jié)果發(fā)現(xiàn),(3)、(4)方法產(chǎn)品外觀好,黃酮甙含量大于24%,而回收率大于1%,特別是(4)法,其黃酮甙含量可達(dá)31.62%。因此,選擇(3)、(4)法進(jìn)行擴(kuò)大實(shí)驗(yàn),以50kg干銀杏葉為原料能取得與小試驗(yàn)相當(dāng)?shù)慕Y(jié)果。經(jīng)中國科學(xué)院上海藥物檢驗(yàn)所檢驗(yàn),總黃酮達(dá)到了39.83%,其中萜內(nèi)酯質(zhì)量分?jǐn)?shù)6%。
2.2 萃取劑濃度的影響
在(3)法中用不同質(zhì)量分?jǐn)?shù)的乙醇進(jìn)行萃取,結(jié)果見表2。試驗(yàn)中乙醇的質(zhì)量分?jǐn)?shù)太低提取不完全;乙醇質(zhì)量分?jǐn)?shù)太高提取雜質(zhì)較多,分離純化難度大,產(chǎn)品中黃酮質(zhì)量分?jǐn)?shù)低于24%,經(jīng)多次試驗(yàn)選擇質(zhì)量分?jǐn)?shù)70%乙醇為宜。
表2 乙醇質(zhì)量分?jǐn)?shù)對(duì)提取物和回收率的影響
w(乙醇)/%w(黃酮甙)/%總回收率/%5014.921.19519.000.8757026.201.90此外,在③法中,酯萃取之前用冷凍除渣效果較好,使酯萃過程中有效成分不易乳化,同時(shí)也可除去雜質(zhì),有利于純化。
2.3 樹脂的選型
在(4)法中樹脂選型很關(guān)鍵,選用國產(chǎn)D101、D201均得到滿意結(jié)果。在進(jìn)入樹脂吸附分離前,必須用石油醚或乙醚抽提葉綠素,葉綠素的存在會(huì)影響樹脂吸附容量及樹脂的再生。
3 結(jié) 語
實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,用醇提酯萃法和醇提樹酯吸附法從銀杏葉中提取黃酮甙和萜內(nèi)酯是可行的,黃酮甙質(zhì)量分?jǐn)?shù)分別為26.20%和31.62%,萜內(nèi)酯均為6%,達(dá)到了德國同類產(chǎn)品的標(biāo)準(zhǔn)。在保證質(zhì)量的前題下,如何提高提取物的收率仍是一有待深入研究的課題。
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